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药敏试验检测试剂盒(MIC测定)使用方法
1. 范围
本方法规定了动物源细菌(大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌、魏氏梭菌和伪结核棒状杆菌)药敏检测试剂盒的操作方法。
2. 材料
除微生物实验室常规灭菌设备外,其他设备和材料如下:
2.1 恒温培养箱35±2℃
2.2 生物安全柜
2.3 浊度计或者标准比浊管
2.3 微量加样器1uL~1000uL
2.4 吸头(与微量加样器匹配)
3. 操作步骤
3.1 取出试剂盒,打开包装待用。
3.2 菌液制备
将无菌棉签用生理盐水润湿后,直接取过夜培养皿上数个新鲜菌落,与适量无菌生理盐水混匀。然后,用标准比浊管或者浊度计校正菌液浓度至0.5麦氏单位(1~2×108CFU/mL)。最后,用试剂盒中的肉汤按照使用说明书要求的倍数稀释,混匀备用。
3.3 菌液接种
除空白对照外,其余的95孔加入制备好(用前要混匀)的菌液100µL
空白对照孔中加入100µL无菌肉汤。盖好板盖并记录菌号。
3.4 孵育
将检测板置于35℃±2℃很稳培养箱中孵育16~18小时。
3.5 观察结果
在衬有黑底板的光线下,用肉眼观察。
先观察阴性对照孔和阳性对照孔:阴性对照孔应无细菌生长,孔内液体未见浑浊;阳性对照孔内应有细菌生长所形成的圆形或者网状沉淀。
如果阴性和阳性对照结果正常,继续观察其余孔内细菌生长情况,在无细菌生长的孔内所含最低抗菌药物浓度即为最低抑菌浓度(MIC)。
4. 结果记录
将MIC结果记录在耐药性检测结果统计表中。
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